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羧酸酯酶(CarE)测试盒-实验原理

更新时间:2021-04-22      浏览次数:833

羧酸酯酶(CarE)测试盒-实验原理

 

测定意义:哺乳动物CarE,也称脂族酯酶(aliesterase),广泛分布于组织和器官,属于丝氨酸水解酶家族。CarE催化含酯键、酰胺键和硫酯键的内源性与外源性物质水解,但不能催化水解乙酰胆碱及其类似物。CarE参与脂质运输和代谢,并且与多种药物、环境毒物以及致癌物的解毒和代谢有关,有机磷农药可结合并且抑制CarE活性。

测定原理:CarE能催化乙酸-1-萘酯生成萘酯,固篮显色;在450 nm光吸收增加速率,计算CarE活性。

需要的仪器,耗材:紫外分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、低温离心机、水浴锅、可调式移液枪和蒸馏水。

样本处理

细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照每200万细菌或细胞加入400μL提取液, 超声波破碎细胞(功率20%,超声3s,间隔10s,重复30次);然后15000rpm,4℃,离心10min,取上清(若上清 不够澄清,建议重复上述离心步骤),置于冰上待检。

组织:按照组织质量(g): 提取液体积(mL)为1 : 5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进 行冰浴匀浆。15000rpm,4℃,离心10min,取上清(若上清不够澄清,建议重复上述离心步骤),置于冰上待检。
 

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