小鼠白细胞介素20(IL-20)ELISA检测试剂盒一步法测定原理

小鼠白细胞介素20(IL-20)ELISA检测试剂盒一步法测定原理

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被小鼠白细胞介素20(IL-20)捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的小鼠白细胞介素20(IL-20)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度.

ELISA（酶联免疫吸附测定）是一种基于多孔板的免疫测定法,将通常作为检测成分之一的抗体或样品吸附在固体表面（此方法采多孔板）.ELISA以相对低廉的成本,快速 定量且灵敏地检测分析物,是容易的分析方法之一.此外,ELISA还可轻松改造为更高通量筛选方法,帮助研究人员通过单次运行检测大量样品.夹心法 直接法和竞争法ELISAs

我们的ELISA采用简单易用的方法,可用于研究血清 血浆 细胞培养上清液或裂解液等各种基质中的可溶性蛋白标志物.包括1000多种“仅供研究使用"的检测试剂盒,适用的样本类型包括人 小鼠 大鼠等各种动物模型（如农业和伴生动物）.每份试剂盒都提供特定实验方案及96孔板所需的试剂.ELISA试剂盒主要为96孔规格,目标物检测和定量所需试剂都由厂商提供.采用夹心法 直接法和竞争法等各种ELISA方法.

夹心法使用针对同一目标抗原不同表位的一对单克隆抗体(mAb).固定在微孔板中的一抗,用于将蛋白从溶液中提取出来.二抗则用于完成“夹心",提供表示目标抗原存在的信号.试剂盒提供重组形式的已知含量的抗原蛋白,方便用户建立标准曲线解析样品信号.我们大部分产品采用的都是这种夹心法ELISA.

直接法和竞争法比较少见.直接法先用一种单抗检测固定在微孔板上的样品.然后一抗会与的酶标二抗结合提供信号.

竞争法在微孔板上预包被已知含量的生物标志物.酶标抗体与样品共同孵育,并与预包被抗体进行“竞争性"结合反应,具体结果取决于样品中目标物的浓度.于是游离抗体能与微孔板上的抗原结合,并在样品洗去后呈现信号.该信号与目标标志物的浓度成反比.

需自备的设备及试剂： 

1. 450±10nm 滤光片酶标仪

2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL.

3. Eppendorf 移液器.

4. 蒸馏水或去离子水.

5. 脱脂棉吸水纸.

6. 37℃恒温箱.

8. 准备若干个标准品稀释管.

样本处理及要求：

1. 血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

2. 血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。

4. 细胞培养物上清：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

5. 其它生物标本：1000×g离心20分钟，取上清即可检测。

6. 样品外观：样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。

7. 样品保存：样品收集后若在1周内进行检测的可保存于4℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃（1个月内检测），或-80℃（6个月内检测），避免反复冻融，标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。