人肾损伤分子 1（Kim-1）检测试剂盒（ELISA）说明书

人肾损伤分子 1（Kim-1）检测试剂盒（ELISA）说明书本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人肾损伤分子1（Kim-1）水平。用纯化的人肾损伤分子1（Kim-1） 捕获抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被的微孔中依次加入人肾损伤分子1（Kim-1），再与HRP标记 的检测抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化 下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人肾损伤分子1（Kim-1）呈正 相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人肾损伤分子1（Kim-1） 含量。

产品组成：

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试剂盒性能： 1.样品线性回归与预期浓度相关系数 R 值为 0.95 以上。 

2.批内变异系数与批间变异系数应分别小于 10%和 15% 。 

检测范围： 0.25 ng/mL - 8 ng/mL 

灵敏度： 检测浓度小于 0.1 ng/mL

1. 严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温 20-25℃。

使用后立即冷藏保存试剂。

2. 洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干

燥掉。

3. 消除板底残留的液体和手指印，否则影响 OD 值。

4. 底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用。

5. 避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。

6. 在储存和温育时避免强光直接照射。

7. 平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。

8. 任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应

试剂的生物活性。

9. 不能使用过期产品。

10. 如果可能传播疾病，所有的样品都应管理好，按照规定的程序处理样品和检测装置。

试剂准备：

试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。

20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。2021 版

操作步骤：

1. 标准品的加样：设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品 50μL；。

2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标

包被板上待测样品孔中先加样品稀释液 40μl，然后再加待测样品 10μl（样品最终稀释度为 5 倍）。

加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3. 加酶：每孔加入酶标试剂 100μl，空白孔除外。

4. 温育：用封板膜封板后置 37℃温育 60 分钟。

5. 配液：将 20 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 20 倍稀释后备用。

6. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此重复 5 次，拍

干。

7.

显色：每孔先加入显色剂 A50μl，再加入显色剂 B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色 15 分钟.

8. 终止：每孔加终止液 50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

测定：以空白孔调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（

OD 值）。 测定应在加终止液后 15 分钟以

内进行。