谈谈ELISA实验中关于跳孔的疑问及解决方法

更新时间：2021-08-10

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　　今天小编给大家讲讲ELISA实验中关于跳孔的疑问及解决方法：

　　问：我刚配置试剂的时候中断了，这是否会影响我的实验结果?

　　答：这可能会导致产生波动的曲线。在移液之前确定所有的标准品或者样品是否配制完好。请在试剂配制完的15-20分钟内滴加入板内。(除非特别说明)

　　问：我是否需要一个多道移液器?

　　答：在配制诸如底物，酶结合物，或者稀释液的时候，最好选择连续或多道移液器。

　　问：如果我没有平衡试剂会怎样?

　　答：没有平衡的试剂会导致孔之间温度不均，使整个酶标板的信号产生变异。除非特别说明，试剂一般在使用之前都要平衡至室温。

　　每次检测都会有推荐的孵育时间和温度。冷冻的试剂一般需要更长的孵育、间。所以最好使用说明书上推荐的孵育温度和时间。

　　问：我是否需要盖板?

　　答：参看试剂盒内说明书。如果说明书内的实验步骤中有推荐使用盖板，则在使用时应选用与酶标板配套的盖板，使边缘与酶标板紧密契合。如果盖板的一边突起，则会产生信号的差别。

　　问：酶标仪的设置怎样影响我的结果?

　　答：对于底物测定，如果读数时间等于或超过2秒/孔，使从第一孔到最后一孔在读书时存在时间上的延误，会导致结果的异变。在底物反应阶段，辣根过氧化物酶会一直作用直到底物反应*。而由于时间的延误，底物越来越少，底物反应也受到影响。将酶标仪的读数时间设定为1.0秒/孔。

　　问：我是否可以根据自己的方案来调整孵育时间?

　　答：更改孵育时间或温度会导致检测不能达到平衡或过度反应。请按照说明书推荐的孵育时间和温度操作。如果同时进行多项检测，对每孔必需分别计时已避免孵育不足或过度孵育。