人基质金属蛋白酶10ELISA试剂盒操作步骤

样本处理及要求

1.  血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20 分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2.  血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
3.  组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。

4.  细胞培养物上清或其它生物标本：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

注：标本溶血会影响后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。

  试剂盒组成及试剂配制 
1. 酶联板（Assay plate ）：一块（96孔）。 
2. 标准品（Standard）：6瓶。
3. 生物素标记抗体稀释液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。
4. 辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。
5. 生物素标记抗体（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）
7. 辣根过氧化物酶标记亲和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）
6. 底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。 
7. 浓洗涤液（Wash Buffer）：1×30ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。 
8. 终止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）

 人基质金属蛋白酶10ELISA试剂盒操作步骤

【样本收集保存】

　　1、血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

　　2、血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。

　　3、细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

　　4、组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。

　　5、保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。